Septin 8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422891

Panoramica

Sept8 codifica la septina 8, una proteina citoscheletrica legante il GTP che si assembla in filamenti di septine etero-oligomerici e in strutture ad anello che fungono da impalcatura per le membrane e organizzano l’interfaccia tra actina e microtubuli. La septina 8 contribuisce alla citochinesi, alla polarità cellulare e al traffico vescicolare, e aiuta a compartimentalizzare la segnalazione formando barriere di diffusione in domini di membrana specializzati. Nei neuroni, complessi di septine contenenti septina 8 sono associati alla morfogenesi dei neuriti e all’organizzazione sinaptica, supportando studi sullo sviluppo e sul mantenimento dei circuiti in modelli murini. Una dinamica alterata della rete di septine è stata associata a modifiche della divisione cellulare e del rimodellamento del citoscheletro osservate in contesti di ricerca oncologica e sulle neurodegenerazioni, rendendo Sept8 un bersaglio utile per l’analisi meccanicistica delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Septin 8 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sept8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sept8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sept8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Septin 8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sept8 per lo studio della segnalazione di Septin 8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sept8 critici per la funzione di Septin 8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sept8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Septin 8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Septin 8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sept8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Septin 8 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Septin 8 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sept8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sept8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.