Septin 8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422891

Descripción general

Sept8 codifica la septina 8, una proteína citosquelética de unión a GTP que se ensambla en filamentos de septinas hetero-oligoméricos y estructuras en forma de anillo que sirven de andamiaje para las membranas y organizan la interfaz actina–microtúbulos. La septina 8 contribuye a la citocinesis, la polaridad celular y el tráfico vesicular, y ayuda a compartimentalizar la señalización al formar barreras de difusión en dominios de membrana especializados. En neuronas, los complejos de septinas que contienen septina 8 se han vinculado con la morfogénesis de neuritas y la organización sináptica, lo que respalda estudios del desarrollo y el mantenimiento de circuitos en modelos murinos. La desregulación de la dinámica de la red de septinas se ha asociado con alteraciones en la división celular y la remodelación del citoesqueleto observadas en contextos de investigación sobre cáncer y neurodegeneración, lo que convierte a Sept8 en una diana útil para el análisis mecanístico de vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Septin 8 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sept8 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sept8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sept8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Septin 8.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sept8 para la investigación de la señalización de Septin 8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sept8 críticos para la función de Septin 8
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sept8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Septin 8 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Septin 8 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sept8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Septin 8 (m) y el plásmido HDR Septin 8 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sept8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sept8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.