Plasmide CRISPR d'Activation (h) Septin 7: sc-401655-ACT

Le gène humain **SEPT7** code la septine 7, un composant central des filaments de septines hétéro-oligomériques, qui jouent le rôle de barrières de diffusion et d’échafaudages du cytosquelette. La septine 7 coordonne l’organisation de l’actine et des microtubules afin de soutenir la cytokinèse, la polarité cellulaire, le remodelage membranaire et le trafic vésiculaire, et elle contribue à l’architecture du corps intermédiaire (midbody) lors de la division cellulaire. Par ces fonctions, **SEPT7** influence des processus liés à la prolifération et à la migration et est fréquemment étudié dans le contexte des dérégulations du cytosquelette observées en biologie du cancer ainsi que des mécanismes impliqués dans les maladies neuro-inflammatoires ou neurodégénératives. Ses interactions au sein des complexes de septines relient également **SEPT7** à des voies qui régulent la stabilité corticale, le contrôle de la forme cellulaire et la compartimentation des protéines membranaires.

Septin 7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SEPT7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Septin 7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SEPT7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SEPT7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Septin 7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SEPT7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Septin 7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Septin 7 dans les cellules tumorales présentant une expression de SEPT7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.