Septin 14 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406949

Panoramica

SEPT14 codifica la septina 14, un membro della famiglia delle septine, proteine citoscheletriche leganti il GTP che si assemblano in filamenti etero-oligomerici e in anelli di ordine superiore. La septina 14 contribuisce all’organizzazione dell’interfaccia actina–microtubuli, al rimodellamento della membrana e alla formazione di barriere di diffusione che supportano la citocinesi, la polarità cellulare e il traffico vescicolare. L’impalcatura dipendente dalle septine coordina inoltre la segnalazione e la compartimentalizzazione proteica a livello della corteccia cellulare, collegando la dinamica del citoscheletro alla progressione del ciclo cellulare. Un’espressione deregolata delle septine o un’alterata organizzazione dei filamenti è stata associata a modifiche della proliferazione e dell’architettura cellulare in contesti rilevanti per la malattia, a sostegno dell’interesse per lo studio di SEPT14 nei meccanismi di disfunzione del citoscheletro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Septin 14 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SEPT14 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SEPT14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SEPT14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Septin 14.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SEPT14 per lo studio della segnalazione di Septin 14, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SEPT14 critici per la funzione di Septin 14
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SEPT14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Septin 14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Septin 14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SEPT14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Septin 14 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Septin 14 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SEPT14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SEPT14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.