Septin 14 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406949

Descripción general

SEPT14 codifica la septina 14, un miembro de la familia de septinas, proteínas citoesqueléticas de unión a GTP que se ensamblan en filamentos hetero-oligoméricos y anillos de orden superior. La septina 14 contribuye a la organización de la interfaz actina–microtúbulos, al remodelado de membranas y al establecimiento de barreras de difusión que sostienen la citocinesis, la polaridad celular y el tráfico vesicular. El andamiaje dependiente de septinas también coordina la señalización y la compartimentalización de proteínas en la corteza celular, vinculando la dinámica del citoesqueleto con la progresión del ciclo celular. La expresión desregulada de septinas o la organización anómala de sus filamentos se ha asociado con alteraciones de la proliferación y de la arquitectura celular en contextos relevantes para enfermedades, lo que respalda la investigación de SEPT14 en los mecanismos de disfunción del citoesqueleto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Septin 14 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SEPT14 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SEPT14 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SEPT14 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Septin 14.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SEPT14 para la investigación de la señalización de Septin 14, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SEPT14 críticos para la función de Septin 14
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SEPT14 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Septin 14 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Septin 14 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SEPT14. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Septin 14 (h) y el plásmido HDR Septin 14 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SEPT14 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SEPT14 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.