Plasmide Double Nickase (m) SEMA7A: sc-422890-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) SEMA7A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SEMA7A Double Nickase (m) et le plasmide SEMA7A Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Sema7a. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SEMA7A Antibody (C-6): sc-374432
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) SEMA7A | sc-422890-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Sema7a** code la sémaphorine 7A (SEMA7A), une protéine de guidage et d’immunomodulation ancrée au glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui régule l’adhérence cellulaire, la migration et la croissance des neurites. SEMA7A transmet ses signaux via des intégrines telles que ITGA1/ITGB1 et peut influencer la dynamique des adhésions focales, les voies MAPK et le remodelage du cytosquelette, reliant des signaux extracellulaires au mouvement directionnel et à l’organisation des tissus. Dans des contextes immunitaires et stromaux, SEMA7A contribue au trafic des leucocytes et à la signalisation inflammatoire, et des altérations de son expression ont été associées à la neuroinflammation, au remodelage fibrotique et à la biologie du microenvironnement tumoral. Ces fonctions font de **Sema7a** une cible utile pour disséquer, dans des modèles murins, les voies contrôlant le guidage axonal, l’activation des cellules immunitaires et la motilité cellulaire induite par le microenvironnement.
SEMA7A Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sema7a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sema7a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sema7a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sema7a.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.