Plasmide Double Nickase (m) SEMA6D: sc-431980-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) SEMA6D correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SEMA6D Double Nickase (m) et le plasmide SEMA6D Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Sema6d. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SEMA6D Antibody (A-8): sc-393258
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) SEMA6D | sc-431980-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) SEMA6D | sc-431980-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Sema6d code la sémaphorine murine SEMA6D, un signal de guidage transmembranaire qui transmet des signaux via des récepteurs de type plexine afin de réguler la communication cellule–cellule dépendante du contact. SEMA6D module le remodelage du cytosquelette, la migration directionnelle et le guidage axonal, reliant la signalisation sémaphorine–plexine à l’activité des GTPases de la famille Rho et, en aval, à la dynamique de l’actine. Au-delà de l’organisation des réseaux neuronaux, SEMA6D contribue à la morphogenèse tissulaire ainsi qu’à des processus vasculaires et immunitaires, dans lesquels les voies de guidage déterminent le positionnement cellulaire. Une signalisation des sémaphorines dérégulée, notamment via une expression altérée de Sema6d, est utilisée pour explorer les mécanismes d’innervation aberrante, de trafic des cellules inflammatoires et de remodelage du microenvironnement dans des modèles pertinents pour l’étude des maladies.
SEMA6D Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sema6d dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sema6d. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sema6d. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sema6d.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.