SEMA6B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422888

Panoramica

Sema6b codifica la semaforina-6B (SEMA6B), un segnale guida transmembrana che trasduce segnali attraverso recettori della famiglia delle plexine per regolare la comunicazione cellula-cellula, il rimodellamento del citoscheletro e la migrazione direzionale. Nel sistema nervoso contribuisce alla guida assonale, alla crescita dei neuriti e all’organizzazione sinaptica, integrandosi con vie dipendenti da Rho GTPasi e chinasi che modellano la dinamica del cono di crescita e il patterning dei tessuti. Oltre al neurosviluppo, la segnalazione delle semaforine influenza il posizionamento delle cellule immunitarie e il rimodellamento vascolare, collegando processi dipendenti da SEMA6B a fenotipi associati a infiammazione e angiogenesi. Alterazioni della segnalazione semaforina–plexina sono state implicate in anomalie dello sviluppo e in programmi di motilità cellulare deregolati rilevanti in contesti neurologici e oncogenici, fornendo una motivazione per studi meccanicistici in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA6B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sema6b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sema6b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sema6b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SEMA6B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sema6b per lo studio della segnalazione di SEMA6B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sema6b critici per la funzione di SEMA6B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sema6b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SEMA6B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SEMA6B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sema6b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SEMA6B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SEMA6B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sema6b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sema6b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.