SEMA6B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422888

Descripción general

Sema6b codifica la semaforina-6B (SEMA6B), una señal de guía transmembrana que transmite señales a través de receptores de la familia de las plexinas para regular la comunicación célula–célula, la remodelación del citoesqueleto y la migración direccional. En el sistema nervioso contribuye a la guía axonal, al crecimiento de neuritas y a la organización sináptica, integrándose con vías dependientes de GTPasas Rho y de quinasas que moldean la dinámica del cono de crecimiento y el patrón tisular. Más allá del neurodesarrollo, la señalización de semaforinas influye en el posicionamiento de células inmunitarias y en la remodelación vascular, vinculando procesos dependientes de SEMA6B con fenotipos asociados a la inflamación y la angiogénesis. La alteración de la señalización semaforina–plexina se ha implicado en anomalías del desarrollo y en programas desregulados de motilidad celular relevantes en contextos neurológicos y oncogénicos, lo que aporta una base para estudios mecanísticos en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SEMA6B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sema6b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sema6b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sema6b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SEMA6B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sema6b para la investigación de la señalización de SEMA6B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sema6b críticos para la función de SEMA6B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sema6b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SEMA6B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SEMA6B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sema6b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SEMA6B (m) y el plásmido HDR SEMA6B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sema6b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sema6b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.