SEMA6A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422887
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SEMA6A El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SEMA6A, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SEMA6A Anticuerpo (B-3): sc-398302
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SEMA6A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422887 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Sema6a codifica la señal de guía transmembrana SEMA6A, una semaforina de clase 6 que da forma al ensamblaje de los circuitos neuronales al regular el comportamiento del cono de crecimiento, el guiado axonal y la migración neuronal. Mediante interacciones con receptores plexina y la señalización posterior de GTPasas de la familia Rho, SEMA6A influye en la dinámica del citoesqueleto, la adhesión celular y la repulsión mediada por contacto durante el desarrollo. En modelos de ratón, la alteración de la función de Sema6a se ha vinculado a defectos en la conectividad tálamo-cortical y corticoespinal y a fenotipos neurodeliberativos más amplios, lo que respalda su relevancia para los mecanismos subyacentes a los trastornos del cableado neuronal. La señalización dependiente de SEMA6A también se estudia en contextos en los que las vías de semaforinas modulan la motilidad celular y la organización de los tejidos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SEMA6A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sema6a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sema6a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sema6a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SEMA6A.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sema6a para la investigación de la señalización de SEMA6A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Sema6a críticos para la función de SEMA6A
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sema6a para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SEMA6A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SEMA6A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sema6a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SEMA6A (m) y el plásmido HDR SEMA6A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sema6a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sema6a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.