SEMA5B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422886

Descripción general

Sema5b codifica la señal de guía transmembrana SEMA5B, un miembro de la familia de las semaforinas que regula la señalización dependiente del contacto durante el desarrollo neural y el ensamblaje de circuitos sinápticos. SEMA5B influye en la guía axonal, el patrón de las dendritas y el crecimiento de neuritas mediante vías que implican receptores plexina y una remodelación posterior del citoesqueleto. En modelos murinos, la actividad alterada de Sema5b se ha asociado con cambios en la conectividad y la plasticidad neuronales, lo que respalda su relevancia para el estudio de mecanismos de enfermedades del neurodesarrollo y neuropsiquiátricas. Su expresión en el sistema nervioso también lo convierte en un nodo útil para investigar programas de comunicación célula–célula que determinan el patrónamiento tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SEMA5B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sema5b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sema5b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sema5b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SEMA5B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sema5b para la investigación de la señalización de SEMA5B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sema5b críticos para la función de SEMA5B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sema5b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SEMA5B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SEMA5B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sema5b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SEMA5B (m) y el plásmido HDR SEMA5B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sema5b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sema5b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.