Plásmido Doble Nickase (m) SEMA5A: sc-422885-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)SEMA5A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SEMA5A (m) y el plásmido de doble nickasa SEMA5A (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Sema5a. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) SEMA5A | sc-422885-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) SEMA5A | sc-422885-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Sema5a del ratón codifica la señal de guía transmembrana SEMA5A, un miembro de la familia de las semaforinas que modula la navegación axonal, el patrón de ramificación dendrítica y la motilidad celular mediante interacciones con receptores que influyen en la remodelación del citoesqueleto y en la dinámica de adhesión. La señalización de SEMA5A se integra con vías que controlan la guía del cono de crecimiento y las interacciones célula–célula/matriz extracelular (MEC), contribuyendo a la formación de circuitos neuronales y a la organización tisular. Las alteraciones en la expresión o la función de Sema5a se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neuroconductuales, y la desregulación de la señalización de semaforinas también se estudia en contextos de programas anómalos de migración e invasión. Estas características hacen de Sema5a una diana útil para desentrañar mecanismos de cableado durante el desarrollo, conectividad sináptica y regulación del movimiento celular mediada por semaforinas.
SEMA5A El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Sema5a en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Sema5a. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Sema5a. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Sema5a alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.