SEMA4F Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422884

Descripción general

Sema4f codifica la semaforina murina SEMA4F, una señal de guía transmembrana que ayuda a coordinar la comunicación célula–célula y la organización espacial de los tejidos. SEMA4F activa la señalización de plexina/neuropilina para modular la dinámica del citoesqueleto, el crecimiento de neuritas, la navegación axonal y la remodelación asociada a sinapsis mediante vías que convergen en las GTPasas de la familia Rho y la regulación posterior de la actina. Además del desarrollo y la plasticidad del sistema nervioso, la señalización por semaforinas contribuye al posicionamiento de células inmunitarias y a su comportamiento migratorio en diversos microambientes. Las redes semaforina–plexina desreguladas se han implicado en fenotipos del neurodesarrollo y de la neuroinflamación, lo que convierte a Sema4f en un nodo útil para diseccionar programas de guía y motilidad en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SEMA4F (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sema4f en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sema4f junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sema4f tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SEMA4F.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sema4f para la investigación de la señalización de SEMA4F, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sema4f críticos para la función de SEMA4F
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sema4f para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SEMA4F CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SEMA4F CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sema4f. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SEMA4F (m) y el plásmido HDR SEMA4F (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sema4f para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sema4f definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.