SEMA4A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422880

Descripción general

Sema4a codifica la semaforina-4A (SEMA4A), una señal de guía asociada a la membrana que también funciona como un ligando inmunorregulador que influye en la comunicación célula–célula. En ratones, SEMA4A contribuye a la guía axonal y a la organización de sinapsis, a la vez que modula la activación y diferenciación de las células T, y las interacciones con células presentadoras de antígeno, a través de redes de señalización de semaforinas y vías mediadas por receptores. Estos procesos se entrecruzan con la remodelación del citoesqueleto, la migración celular y programas de señalización inflamatoria que determinan la homeostasis tisular. La actividad desregulada de Sema4a se ha asociado con patología impulsada por el sistema inmunitario y con mecanismos neuroinflamatorios, lo que respalda su estudio en modelos de autoinmunidad, neurobiología e inflamación de tejidos de barrera.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SEMA4A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sema4a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sema4a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sema4a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SEMA4A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sema4a para la investigación de la señalización de SEMA4A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sema4a críticos para la función de SEMA4A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sema4a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SEMA4A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SEMA4A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sema4a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SEMA4A (m) y el plásmido HDR SEMA4A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sema4a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sema4a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.