SEMA3G Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-432329-ACT

Sema3g codifica a semaforina 3G (SEMA3G), uma semaforina secretada de classe 3 que ajuda a coordenar sinais de orientação intercelular que afetam a migração celular, a adesão e a padronização dos tecidos. A SEMA3G sinaliza principalmente por meio de complexos receptores de neuropilina e plexina para modular a dinâmica do citoesqueleto e vias downstream, como a sinalização de GTPases da família Rho, influenciando assim a motilidade direcional e a morfogênese. Em sistemas murinos, alterações na sinalização de semaforinas têm sido associadas à desregulação do padrão neurovascular, ao remodelamento angiogênico e ao tráfego de células inflamatórias, tornando o Sema3g relevante para estudos de desenvolvimento e de mudanças no microambiente associadas a doenças. O contexto dessa via dá suporte à investigação de como ligantes extracelulares de orientação remodelam o comportamento endotelial, a conectividade neuronal e a organização do estroma.

SEMA3G O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sema3g sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SEMA3G O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sema3g em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sema3g, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SEMA3G. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sema3g nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SEMA3G no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SEMA3G em células tumorais com expressão de Sema3g silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.