SEMA3F Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422879

Panoramica

Sema3f codifica la semaforina-3F (SEMA3F), un segnale guida secreto che trasduce principalmente attraverso complessi recettoriali di neuropiline e plessine per regolare la dinamica del citoscheletro, l’adesione e la migrazione direzionale. Modulando l’attività delle GTPasi della famiglia Rho e il conseguente rimodellamento dell’actina, SEMA3F influenza l’orientamento degli assoni, la formazione dei pattern vascolari e l’organizzazione dei tessuti epiteliali. Nel microambiente immunitario e stromale, la segnalazione repulsiva dipendente da SEMA3F può modellare il posizionamento e la motilità cellulare, intersecandosi con gli output delle vie delle integrine, MAPK e PI3K. Una segnalazione di SEMA3F deregolata è stata associata ad alterazioni dei fenotipi angiogenici e invasivi in modelli rilevanti per la malattia, supportandone l’uso in studi meccanicistici dello sviluppo e della biologia tumorale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA3F (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sema3f in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sema3f insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sema3f a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SEMA3F.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sema3f per lo studio della segnalazione di SEMA3F, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sema3f critici per la funzione di SEMA3F
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sema3f per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SEMA3F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SEMA3F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sema3f. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SEMA3F Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SEMA3F (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sema3f per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sema3f definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.