SEMA3F Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422879

Descripción general

Sema3f codifica la semaforina‑3F (SEMA3F), una señal guía secretada que actúa principalmente a través de complejos receptores de neuropilina y plexina para regular la dinámica del citoesqueleto, la adhesión y la migración direccional. Al modular la actividad de las GTPasas de la familia Rho y la remodelación de actina aguas abajo, SEMA3F influye en el guiado axonal, el patrón vascular y la organización del tejido epitelial. En el microambiente inmunitario y estromal, la señalización repulsiva dependiente de SEMA3F puede determinar el posicionamiento y la motilidad celular, e interactuar con las salidas de las vías de integrinas, MAPK y PI3K. La desregulación de la señalización de SEMA3F se ha asociado con fenotipos angiogénicos e invasivos alterados en modelos relevantes de enfermedad, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos del desarrollo y la biología tumoral.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SEMA3F (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sema3f en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sema3f junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sema3f tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SEMA3F.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sema3f para la investigación de la señalización de SEMA3F, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sema3f críticos para la función de SEMA3F
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sema3f para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SEMA3F CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SEMA3F CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sema3f. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SEMA3F (m) y el plásmido HDR SEMA3F (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sema3f para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sema3f definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.