SEMA3E Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422878

Panoramica

Il gene murino **Sema3e** codifica la semaforina-3E (SEMA3E), un segnale di guida secreto che agisce principalmente attraverso i recettori plexin per controllare l’orientamento degli assoni, la migrazione neuronale e la strutturazione dei tessuti. SEMA3E modula la dinamica del citoscheletro e l’adesione cellulare, intersecandosi in modo dipendente dal contesto con vie che regolano la motilità, il rimodellamento angiogenico e il traffico delle cellule immunitarie. In letteratura, una deregolazione della segnalazione SEMA3E–plexin è stata associata a uno sviluppo vascolare anomalo e a un comportamento invasivo alterato in modelli di biologia del cancro, a supporto della sua rilevanza per studi sul neurosviluppo e sulla segnalazione del microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA3E (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sema3e in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sema3e insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sema3e a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SEMA3E.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sema3e per lo studio della segnalazione di SEMA3E, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sema3e critici per la funzione di SEMA3E
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sema3e per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SEMA3E CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SEMA3E CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sema3e. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SEMA3E Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SEMA3E (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sema3e per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sema3e definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.