SEMA3E CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422878

概要

マウスのSema3eは、分泌性のガイダンス因子であるセマフォリン3E（SEMA3E）をコードしており、主としてプレキシン受容体を介してシグナルを伝達し、軸索誘導、神経細胞の移動、組織パターニングを制御します。SEMA3Eは細胞骨格ダイナミクスと細胞接着を調節し、状況依存的に、運動性、血管新生に伴うリモデリング、免疫細胞のトラフィッキングを司る経路群と交差します。SEMA3E–プレキシンシグナルの制御異常は、文献において異常な血管発生や、がん生物学モデルにおける浸潤挙動の変化と関連づけられており、神経発生および微小環境シグナル伝達の研究における重要性を裏づけています。

SEMA3E CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSema3e遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sema3e内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sema3eのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SEMA3Eタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SEMA3Eシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sema3e欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SEMA3Eの機能に不可欠なSema3eエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sema3eゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SEMA3E CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSEMA3E CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sema3e遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SEMA3E HDRプラスミド（m）および SEMA3E HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSema3eホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSema3e標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。