SEMA3C Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402489-ACT

SEMA3C codifica la semaforina-3C, un segnale di guida secreto che trasduce segnali attraverso i recettori neuropiline e plexine per regolare la dinamica del citoscheletro, la migrazione direzionale e le interazioni cellula-cellula. Oltre alla guida assonale, SEMA3C contribuisce alla formazione dei pattern vascolari e al rimodellamento tissutale modulando vie di segnalazione che intersecano le GTPasi della famiglia Rho, il turnover delle adesioni focali e l’adesione dipendente dalle integrine. Un’espressione deregolata di SEMA3C è stata riportata in contesti di segnalazione angiogenica aberrante, comportamento cellulare invasivo e comunicazione alterata tra stroma e tumore, rendendola rilevante per studi meccanicistici dei microambienti associati allo sviluppo e alle patologie. La sua attività viene comunemente esaminata in modelli di plasticità epiteliale ed endoteliale, organizzazione della matrice extracellulare e segnalazione delle semaforine mediata da recettori.

SEMA3C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SEMA3C senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SEMA3C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SEMA3C nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SEMA3C, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SEMA3C. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SEMA3C nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SEMA3C nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SEMA3C nelle cellule tumorali con espressione di SEMA3C silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.