Plásmido CRISPR de Activación (h) SEMA3C: sc-402489-ACT

SEMA3C codifica la semaforina-3C, una señal guía secretada que transmite señales a través de receptores neuropilina y plexina para regular la dinámica del citoesqueleto, la migración direccional y las interacciones célula–célula. Más allá de la guía axonal, SEMA3C contribuye al patrón vascular y a la remodelación tisular al modular vías que convergen con las GTPasas de la familia Rho, el recambio de adhesiones focales y la adhesión dependiente de integrinas. Se ha informado de una expresión desregulada de SEMA3C en contextos de señalización angiogénica aberrante, comportamiento celular invasivo y comunicación estroma–tumor alterada, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de microambientes asociados al desarrollo y a enfermedades. Su actividad se examina con frecuencia en modelos de plasticidad epitelial y endotelial, organización de la matriz extracelular y señalización de semaforinas mediada por receptores.

SEMA3C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SEMA3C sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SEMA3C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SEMA3C en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SEMA3C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SEMA3C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SEMA3C y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SEMA3C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SEMA3C en células tumorales con expresión de SEMA3C silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.