SEMA3C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402489-ACT

SEMA3C codifica a Semaforina-3C, uma molécula sinalizadora secretada que atua como pista de orientação, sinalizando por meio de receptores neuropilina e plexina para regular a dinâmica do citoesqueleto, a migração direcional e as interações célula–célula. Além da orientação axonal, a SEMA3C contribui para o padrão de vascularização e para o remodelamento tecidual ao modular vias que se cruzam com as GTPases da família Rho, a renovação de adesões focais e a adesão dependente de integrinas. A expressão desregulada de SEMA3C foi relatada em contextos de sinalização angiogênica aberrante, comportamento celular invasivo e comunicação estroma–tumor alterada, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de microambientes associados ao desenvolvimento e a doenças. Sua atividade é comumente investigada em modelos de plasticidade epitelial e endotelial, organização da matriz extracelular e sinalização de semaforinas mediada por receptores.

SEMA3C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SEMA3C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SEMA3C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SEMA3C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SEMA3C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SEMA3C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SEMA3C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SEMA3C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SEMA3C em células tumorais com expressão de SEMA3C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.