SELH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-415276

Descripción general

SELENOH codifica la selenoproteína H (SELH), una pequeña proteína redox activa enriquecida en el núcleo que contribuye a la defensa antioxidante celular y al mantenimiento de la homeostasis redox mediante una actividad catalítica dependiente de selenio. SELH se asocia con la regulación de la amortiguación de especies reactivas de oxígeno, la estabilidad del genoma y programas transcripcionales sensibles al estrés que influyen en la supervivencia y la diferenciación celular. Como parte de la biología más amplia de las selenoproteínas, SELH interactúa con redes redox asociadas al glutatión y la tioredoxina, y puede modular las respuestas al estrés mitocondrial y del retículo endoplásmico. Las alteraciones en la expresión de SELENOH o en el manejo del selenio se han estudiado en contextos de neurodegeneración, disfunción metabólica y fenotipos de estrés oxidativo asociados al cáncer, lo que motiva estudios mecanísticos en modelos de células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SELH (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SELENOH en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SELENOH junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SELENOH tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SELH.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SELENOH para la investigación de la señalización de SELH, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SELENOH críticos para la función de SELH
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SELENOH para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SELH CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SELH CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SELENOH. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SELH (h) y el plásmido HDR SELH (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SELENOH para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SELENOH definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.