Plasmide CRISPR/Cas9 KO Selenoprotein W (h): sc-405939

Présentation

SELENOW code la sélénoprotéine W, une petite protéine contenant du sélénium, particulièrement abondante dans le muscle et le cerveau, qui contribue à l’homéostasie redox cellulaire grâce à une activité antioxydante dépendante d’un groupement sélénol. Elle est impliquée dans la régulation de l’équilibre des espèces réactives de l’oxygène, le maintien de l’état des thiols protéiques, ainsi que le soutien de l’intégrité du cytosquelette et de l’adaptation au stress dans des conditions oxydatives et inflammatoires. Les processus associés à SELENOW recoupent des réseaux redox dépendants du glutathion et, plus largement, la biologie du sélénium, qui influencent la fonction mitochondriale et les programmes de survie cellulaire. Des altérations de l’expression de SELENOW ont été rapportées dans des contextes de stress oxydatif, de voies associées à la neurodégénérescence, ainsi que d’états métaboliques et inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la signalisation redox et de la susceptibilité au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Selenoprotein W (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SELENOW dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SELENOW, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SELENOW à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Selenoprotein W.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SELENOW pour l'étude de la signalisation de Selenoprotein W, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SELENOW essentiels à la fonction de Selenoprotein W
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SELENOW pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Selenoprotein W plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Selenoprotein W plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SELENOW. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Selenoprotein W plasmide HDR (h) et le Selenoprotein W (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SELENOW pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SELENOW définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.