Plasmide CRISPR/Cas9 KO Selenoprotein P (bovine2): sc-437342

Présentation

La sélénoprotéine P (SELENOP) est une glycoprotéine sécrétée, enrichie en résidus de sélénocystéine, qui agit comme principal facteur de transport et de stockage du sélénium chez les mammifères, en soutenant la distribution systémique du sélénium et l’homéostasie rédox. Elle contribue à la défense antioxydante en délivrant le sélénium nécessaire à la biosynthèse des sélénoprotéines enzymatiques, et influence les réponses cellulaires au stress oxydatif, à l’inflammation et au stress du réticulum endoplasmique. En biologie bovine, SELENOP est pertinente pour la sécrétion hépatique, la régulation vasculaire et métabolique, ainsi que l’immunité dépendante du sélénium, reliant le statut en sélénium aux dommages oxydatifs et à la signalisation inflammatoire. Une expression dérégulée de SELENOP ou une disponibilité altérée du sélénium est associée à une modification de la signalisation rédox et à un déséquilibre métabolique, ce qui en fait un point d’entrée moléculaire utile pour étudier les voies d’adaptation au stress et les interactions nutriment–gène.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Selenoprotein P (bovine2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires bovine. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Selenoprotein P.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de Selenoprotein P, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de Selenoprotein P
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Selenoprotein P plasmide CRISPR/Cas9 KO (bovine) et le Selenoprotein P plasmide CRISPR/Cas9 KO (bovine2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Selenoprotein P plasmide HDR (bovine) et le Selenoprotein P (bovine2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.