Seipin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420617

Descripción general

El Bscl2 de ratón codifica seipina, una proteína de membrana del retículo endoplásmico que coordina la adipogénesis, la biogénesis de las gotas lipídicas y el almacenamiento de lípidos neutros mediante la regulación del flujo de triglicéridos y fosfolípidos en las uniones entre el RE y las gotas lipídicas. La seipina favorece una morfología adecuada de las gotas lipídicas y limita la acumulación aberrante de intermediarios lipídicos que pueden alterar la homeostasis del RE y la composición de las membranas. La alteración de la función de la seipina se ha relacionado con fenotipos de lipodistrofia y con señales metabólicas alteradas, y también se ha asociado a procesos neurodegenerativos en contextos genéticos específicos. Por tanto, Bscl2 constituye un nodo útil para estudiar vías de homeostasis lipídica, sitios de contacto entre orgánulos y la vulnerabilidad metabólica específica de determinados tipos celulares en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Seipin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Bscl2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Bscl2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Bscl2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Seipin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Bscl2 para la investigación de la señalización de Seipin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Bscl2 críticos para la función de Seipin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Bscl2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Seipin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Seipin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Bscl2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Seipin (m) y el plásmido HDR Seipin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Bscl2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Bscl2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.