Sec61β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425892

Descripción general

SEC61B codifica la subunidad beta del translocón Sec61, un componente central del canal de membrana del retículo endoplásmico (RE) que media la importación cotraduccional de proteínas y la integración de polipéptidos nacientes en la vía secretora. En células de ratón, Sec61β favorece la biogénesis de proteínas del RE, coordina el acoplamiento de los ribosomas y contribuye a procesos de proteostasis del RE relacionados con el plegamiento y la degradación asociada al RE (ERAD). Las alteraciones en la función del translocón pueden perturbar la secreción, la homeostasis de proteínas de membrana y la señalización de la respuesta a proteínas desplegadas, vinculando la actividad del complejo SEC61 con la adaptación celular al estrés. Dado que la integridad de la vía secretora sustenta la señalización inmunitaria, el metabolismo y la función neuronal, Sec61b se estudia con frecuencia en el contexto de desequilibrios de proteostasis y mecanismos de enfermedad asociados al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Sec61β (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sec61b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sec61b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sec61b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Sec61β.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sec61b para la investigación de la señalización de Sec61β, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sec61b críticos para la función de Sec61β
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sec61b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Sec61β CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Sec61β CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sec61b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Sec61β (m) y el plásmido HDR Sec61β (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sec61b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sec61b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.