Sec61β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425892

Übersicht

SEC61B kodiert die Beta-Untereinheit des Sec61-Translokons, einer zentralen Komponente des Membrankanals des endoplasmatischen Retikulums (ER), der den kotranslationalen Proteinimport und die Integration neu entstehender Polypeptide in den sekretorischen Weg vermittelt. In Mauszellen unterstützt Sec61β die Biogenese von ER-Proteinen, koordiniert das Andocken von Ribosomen und trägt zu ER-Proteostase-Prozessen bei, die mit Faltung und ER-assoziiertem Abbau (ERAD) verknüpft sind. Eine veränderte Translokon-Funktion kann Sekretion, die Homöostase von Membranproteinen und die Signalgebung der Antwort auf ungefaltete Proteine (Unfolded Protein Response, UPR) stören und stellt damit einen Zusammenhang zwischen der Aktivität des SEC61-Komplexes und der zellulären Anpassung an Stress her. Da die Integrität des sekretorischen Weges grundlegende Bedeutung für Immunsignale, den Stoffwechsel und neuronale Funktionen hat, wird Sec61b häufig im Kontext von Proteostase-Ungleichgewichten und stressassoziierten Krankheitsmechanismen untersucht.

Das Sec61β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sec61b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sec61b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sec61b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Sec61β-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sec61b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Sec61β-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sec61b-Exone abzielen, die für die Sec61β-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sec61b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Sec61β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Sec61β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sec61b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Sec61β HDR-Plasmid (m) und Sec61β HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sec61b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sec61b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.