Sec61α1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424716

Descripción general

Sec61a1 codifica Sec61α1, la subunidad central formadora del poro del translocón Sec61 en la membrana del retículo endoplásmico (RE), que media la importación cotraduccional y postraduccional de proteínas secretoras y de membrana. Al acoplar el acoplamiento del ribosoma con la translocación e integración del péptido, Sec61α1 respalda la biogénesis proteica, el control de calidad del RE y las vías de proteostasis, incluidas la señalización de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) y la degradación asociada al RE (ERAD). La alteración de la función del canal SEC61 se ha vinculado con defectos en la homeostasis de la vía secretora y en las respuestas celulares al estrés, procesos que con frecuencia se implican en modelos de inflamación, disfunción metabólica y neurodegeneración. En sistemas murinos, Sec61a1 ofrece un punto de entrada manejable para estudiar cómo la capacidad de importación al RE moldea la señalización, la diferenciación y la supervivencia bajo estrés proteotóxico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Sec61α1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sec61a1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sec61a1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sec61a1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Sec61α1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sec61a1 para la investigación de la señalización de Sec61α1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sec61a1 críticos para la función de Sec61α1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sec61a1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Sec61α1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Sec61α1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sec61a1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Sec61α1 (m) y el plásmido HDR Sec61α1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sec61a1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sec61a1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.