Plásmido CRISPR de Activación (h) Sec5: sc-405088-ACT

El gen humano **EXOC2** codifica **Sec5**, una subunidad esencial del complejo **exocisto** octamérico que ancla las vesículas secretoras a la membrana plasmática para sostener la exocitosis polarizada. Sec5 coordina el direccionamiento de vesículas con la remodelación de actina y la señalización de pequeñas GTPasas, contribuyendo a la expansión de la membrana, la migración celular, la citocinesis y la entrega regulada de receptores y transportadores. A través de su papel en el tráfico dependiente del exocisto, EXOC2 influye en vías que gobiernan la polaridad epitelial y el crecimiento neuronal, y la alteración de la función del exocisto se ha asociado con proliferación desregulada y fenotipos invasivos en múltiples contextos patológicos. Por lo tanto, los defectos de tráfico vinculados a Sec5 son relevantes para estudios mecanísticos de la dinámica de membranas, la compartimentalización de la señalización y las transiciones de estado celular.

Sec5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EXOC2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Sec5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EXOC2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EXOC2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Sec5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EXOC2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Sec5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Sec5 en células tumorales con expresión de EXOC2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.