Plásmido Doble Nickase (m) SEC16A: sc-432718-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)SEC16A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SEC16A (m) y el plásmido de doble nickasa SEC16A (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Sec16a. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) SEC16A | sc-432718-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) SEC16A | sc-432718-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Sec16a codifica SEC16A, un andamiaje central de los sitios de salida del retículo endoplásmico que organiza el ensamblaje de la cubierta COPII para iniciar el transporte del RE al Golgi. Al coordinar el reclutamiento y la dinámica de SEC23/SEC24 y SEC13/SEC31, SEC16A regula el flujo de la vía secretora y la biogénesis de transportadores que sustentan el tráfico de membranas, la homeostasis de orgánulos y la proteostasis. Las alteraciones del tráfico secretor temprano pueden perturbar el metabolismo lipídico, la secreción de matriz extracelular y la presentación de receptores, procesos relevantes para la adaptación al estrés y las transiciones de estado celular. Por ello, SEC16A se estudia en vías que vinculan la organización del RE con la autofagia, la señalización de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) y la regulación del crecimiento y la diferenciación celular dependiente del tráfico en modelos murinos.
SEC16A El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Sec16a en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Sec16a. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Sec16a. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Sec16a alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.