SDHD Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-403276-KO-2

Descripción general

La subunidad D del complejo succinato deshidrogenasa (SDHD) es un componente esencial de anclaje a membrana del complejo II mitocondrial, que acopla la oxidación de succinato en el ciclo del ácido tricarboxílico (TCA) con la transferencia de electrones al reservorio de ubiquinona de la vía de fosforilación oxidativa (OXPHOS). Al favorecer la conversión de succinato a fumarato y el flujo de la cadena respiratoria, SDHD ayuda a mantener el equilibrio redox mitocondrial, la producción de ATP y la homeostasis de las especies reactivas de oxígeno. La alteración de la función de SDHD modifica la señalización metabólica, incluida la regulación dependiente de succinato de las vías sensibles a la hipoxia y respuestas más amplias de estrés mitocondrial. La desregulación de SDHD está implicada en síndromes de predisposición tumoral hereditarios y esporádicos que afectan a linajes neuroendocrinos y paraganglionares, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos del metabolismo mitocondrial y de la señalización relevante para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SDHD (h2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SDHD en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SDHD junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SDHD tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SDHD.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SDHD para la investigación de la señalización de SDHD, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SDHD críticos para la función de SDHD
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SDHD para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SDHD CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SDHD CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SDHD. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SDHD (h) y el plásmido HDR SDHD (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SDHD para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SDHD definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.