SCP2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422828

Descripción general

El gen Scp2 de ratón codifica la proteína transportadora de esteroles 2 (SCP2), una pequeña proteína de transferencia de lípidos que se une y transporta colesterol, intermediarios de ácidos biliares y acil-CoA de ácidos grasos de cadena larga dentro de las células, con funciones destacadas en el manejo de lípidos a nivel peroxisomal y citosólico. SCP2 favorece el tráfico intracelular de lípidos y contribuye a la β-oxidación peroxisomal, el metabolismo de lípidos éter y la homeostasis de esteroles, conectándose con redes metabólicas lipídicas más amplias que influyen en la composición de membranas y en las respuestas al estrés oxidativo. Las alteraciones en la función de SCP2 se han asociado con un uso desregulado del colesterol y de los ácidos grasos y se estudian con frecuencia en el contexto de la desregulación metabólica y de fenotipos de estrés celular impulsados por lípidos. Por lo tanto, Scp2 es relevante para la investigación mecanística sobre la biología del peroxisoma, el transporte de lípidos y la remodelación de vías metabólicas en tipos celulares relevantes para enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SCP2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Scp2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Scp2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Scp2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SCP2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Scp2 para la investigación de la señalización de SCP2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Scp2 críticos para la función de SCP2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Scp2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SCP2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SCP2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Scp2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SCP2 (m) y el plásmido HDR SCP2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Scp2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Scp2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.