Plásmido CRISPR de Activación (h) SCML2: sc-405003-ACT

SCML2 (sex comb on midleg-like 2) codifica una proteína del grupo Polycomb que contribuye al silenciamiento génico epigenético mediante complejos asociados a la cromatina y una regulación dependiente de marcas de histonas. Se vincula a programas de represión transcripcional que determinan la identidad celular, la diferenciación y procesos del desarrollo de la línea germinal y del sistema nervioso, en consonancia con sus funciones como lector de cromatina y sus interacciones con la maquinaria reguladora de Polycomb. Al modular la accesibilidad en loci del desarrollo, SCML2 influye en estados transcripcionales a escala genómica y puede interactuar con vías que controlan la progresión del ciclo celular y el compromiso de linaje. La expresión desregulada de SCML2 o una actividad de Polycomb alterada se han asociado con estados epigenéticos aberrantes observados en cáncer y con fenotipos del neurodesarrollo, lo que la hace relevante para estudios del control transcripcional y la remodelación de la cromatina asociada a enfermedad.

SCML2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SCML2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SCML2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SCML2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SCML2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SCML2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SCML2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SCML2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SCML2 en células tumorales con expresión de SCML2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.