SCML2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405003-ACT

SCML2 (sex comb on midleg-like 2) codifica uma proteína do grupo Polycomb que contribui para o silenciamento epigenético de genes por meio de complexos associados à cromatina e de regulação dependente de marcas em histonas. Está ligada a programas de repressão transcricional que moldam a identidade celular, a diferenciação e processos de desenvolvimento da linhagem germinativa e do sistema nervoso, em consonância com suas funções como “leitora” de cromatina e suas interações com a maquinaria regulatória Polycomb. Ao modular a acessibilidade em loci do desenvolvimento, a SCML2 influencia estados transcricionais em todo o genoma e pode se cruzar com vias que controlam a progressão do ciclo celular e o comprometimento de linhagem. A expressão desregulada de SCML2 ou a atividade Polycomb alterada tem sido associada a estados epigenéticos aberrantes observados no câncer e a fenótipos do neurodesenvolvimento, tornando-a relevante para estudos de controle transcricional e remodelamento da cromatina associado a doenças.

SCML2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SCML2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SCML2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SCML2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SCML2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SCML2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SCML2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SCML2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SCML2 em células tumorais com expressão de SCML2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.