Plásmido Doble Nickase (h) Sclerostin: sc-401527-NIC

SOST codifica la esclerostina, una glucoproteína secretada producida predominantemente por los osteocitos, que actúa como un inhibidor extracelular clave de la señalización canónica Wnt/β-catenina al unirse a los correceptores LRP5/6 y limitar la diferenciación y la actividad de los osteoblastos. Mediante la modulación de la señalización Wnt y la comunicación cruzada con las vías de BMP, la esclerostina ayuda a regular la formación ósea, la remodelación y las respuestas dependientes de la mecanotransducción en el tejido esquelético. La expresión o función alteradas de SOST se asocian con fenotipos anómalos de masa ósea y se estudian con frecuencia en el contexto de las vías relacionadas con la osteoporosis, la regulación de la densidad ósea y el desarrollo esquelético. Además de la biología esquelética, la regulación de Wnt mediada por esclerostina es relevante para estudios más amplios sobre destino celular y señalización extracelular, donde el tono de la vía Wnt influye en programas de proliferación y diferenciación.

Sclerostin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SOST en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SOST. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SOST. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SOST alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.