Sclerostin Plasmide Double Nickase (h): sc-401527-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Sclerostin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Sclerostin Double Nickase Plasmid (h) e il Sclerostin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SOST. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Sclerostin Antibody (C-11): sc-518161
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Sclerostin Plasmide Double Nickase (h) | sc-401527-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Sclerostin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401527-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SOST codifica per la sclerostina, una glicoproteina secreta prodotta prevalentemente dagli osteociti, che agisce come un importante inibitore extracellulare della segnalazione canonica Wnt/β-catenina legandosi ai co-recettori LRP5/6 e limitando la differenziazione e l’attività degli osteoblasti. Attraverso la modulazione della via Wnt e il cross-talk con le vie BMP, la sclerostina contribuisce a regolare la formazione ossea, il rimodellamento e le risposte nel tessuto scheletrico dipendenti dalla meccanotrasduzione. Alterazioni dell’espressione o della funzione di SOST sono associate a fenotipi di massa ossea anomali e vengono spesso studiate nel contesto dei pathway legati all’osteoporosi, della regolazione della densità minerale ossea e dello sviluppo scheletrico. Oltre alla biologia dello scheletro, la regolazione della via Wnt mediata dalla sclerostina è rilevante anche per studi più ampi sul destino cellulare e sulla segnalazione extracellulare, in cui il “tono” della via Wnt influenza programmi di proliferazione e differenziamento.
Sclerostin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SOST nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SOST. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SOST. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SOST interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.