Sclerostin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401527
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Sclerostin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Sclerostin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Sclerostin Anticuerpo (C-11): sc-518161
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Sclerostin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401527 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
SOST codifica la esclerostina, una glucoproteína secretada producida principalmente por los osteocitos que actúa como un regulador negativo clave de la formación ósea. La esclerostina se une a los correceptores LRP5/6 para antagonizar la señalización canónica Wnt/β-catenina, modulando así la diferenciación de los osteoblastos, el depósito de matriz ósea y la remodelación del esqueleto. A través de su control de programas transcripcionales impulsados por Wnt, SOST influye en el acoplamiento osteoblasto–osteoclasto y en la homeostasis mineral. La actividad desregulada de SOST se asocia con fenotipos de masa ósea alterada y se estudia con frecuencia en el contexto de la biología de la osteoporosis, las displasias esqueléticas y los cambios en la remodelación ósea observados en trastornos inflamatorios y metabólicos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Sclerostin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SOST en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SOST junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SOST tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Sclerostin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SOST para la investigación de la señalización de Sclerostin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de SOST críticos para la función de Sclerostin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SOST para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Sclerostin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Sclerostin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SOST. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Sclerostin (h) y el plásmido HDR Sclerostin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SOST para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SOST definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.