Scleraxis CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422833

Übersicht

Scx kodiert Scleraxis, einen basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor, der als stammlinienbestimmender Regulator der Sehnen- und Bandentwicklung fungiert. Scleraxis koordiniert Genprogramme der extrazellulären Matrix und die tenogene Differenzierung, indem es Signale aus der Mechanotransduktion sowie aus Wachstumsfaktorwegen wie TGF-β und verwandten Signalnetzwerken integriert, die die Fibroblastenidentität und den Matrixumbau prägen. In Mausmodellen ist die Scx-Aktivität eng mit der Homöostase des Bindegewebes verknüpft und beeinflusst während Entwicklung und Reparatur die Kollagenorganisation, Zellmigration und Gewebereifung. Eine Fehlregulation Scx-assoziierter Transkriptionsprogramme ist relevant für Untersuchungen zu Tendinopathien, fibrosisähnlichem Matrixumbau und Reaktionen auf Verletzungen des Bewegungsapparats.

Das Scleraxis CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Scx-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Scx-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Scx nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Scleraxis-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Scx-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Scleraxis-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Scx-Exone abzielen, die für die Scleraxis-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Scx-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Scleraxis CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Scleraxis CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Scx-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Scleraxis HDR-Plasmid (m) und Scleraxis HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Scx-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Scx-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.