SCGF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422813

Descripción general

Clec11a codifica el factor de crecimiento de células madre (SCGF), una proteína secretada de tipo citocina que sostiene la hematopoyesis al promover la supervivencia y la proliferación de progenitores tempranos en el microambiente de la médula ósea. SCGF contribuye a la regulación del mantenimiento de células madre y progenitoras, influyendo en la producción de linajes y en la recuperación tras el estrés hematopoyético. La actividad de Clec11a se estudia comúnmente en el contexto de redes de señalización estromal–hematopoyética y de vías impulsadas por factores de crecimiento que moldean el desarrollo mieloide y eritroide. La desregulación de la señalización asociada a SCGF se ha vinculado con una función alterada de los progenitores y es relevante para estudios mecanísticos de trastornos hematológicos y de la disfunción del nicho de médula ósea en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SCGF (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Clec11a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Clec11a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Clec11a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SCGF.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Clec11a para la investigación de la señalización de SCGF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Clec11a críticos para la función de SCGF
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Clec11a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SCGF CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SCGF CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Clec11a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SCGF (m) y el plásmido HDR SCGF (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Clec11a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Clec11a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.