Particules Lentivirales d'Activation (m) SCG10: sc-422814-LAC

Stmn2 code pour SCG10 (également appelée stathmine-2), une protéine déstabilisatrice des microtubules, enrichie dans les neurones, qui régule la dynamique de la tubuline, l’extension des neurites et le comportement du cône de croissance axonal. En modulant le renouvellement des microtubules, SCG10 influence le transport intracellulaire, la polarité neuronale et le remodelage dépendant de l’activité qui soutient le développement et la connectivité synaptique. Des altérations de l’expression et du processing de STMN2/SCG10 ont été associées aux réponses neuronales au stress et à une maintenance axonale perturbée, ce qui en fait une cible pertinente pour les études sur la neurodégénérescence et les lésions des nerfs périphériques. Dans les modèles murins, la perturbation de Stmn2 est couramment utilisée pour étudier les programmes de remodelage du cytosquelette qui façonnent la formation des circuits et la résilience neuronale.

Les particules d'activation lentivirales SCG10 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Stmn2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SCG10 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Stmn2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SCG10. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Stmn2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.