Plásmido CRISPR de Activación (m) SCG10: sc-422814-ACT

Stmn2 codifica SCG10, una fosfoproteína de la familia de las estatminas enriquecida en neuronas que regula la dinámica de los microtúbulos al unirse a la tubulina y promover la desestabilización de los microtúbulos durante la iniciación de neuritas, el crecimiento axonal y la remodelación del cono de crecimiento en células de ratón. SCG10 se transporta a las neuritas y a los conos de crecimiento, vinculando la remodelación del citoesqueleto con el tráfico intracelular y la plasticidad neuronal dependiente de la actividad. A través de su control del recambio de microtúbulos, SCG10 influye en procesos como la regeneración axonal, la conectividad sináptica y los programas de diferenciación neuronal. La alteración de la regulación de STMN2/SCG10 se estudia con frecuencia en el contexto de la neurodegeneración y las axonopatías, incluidas vías implicadas en la vulnerabilidad de las motoneuronas y en el mantenimiento axonal deficiente.

SCG10 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Stmn2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SCG10 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Stmn2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Stmn2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SCG10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Stmn2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SCG10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SCG10 en células tumorales con expresión de Stmn2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.