SCD Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401516

Descripción general

La estearoil-CoA desaturasa (SCD) es una enzima de membrana del retículo endoplásmico que introduce un doble enlace cis en acil-CoA de ácidos grasos saturados, generando ácidos grasos monoinsaturados como el oleato y el palmitoleato. Al controlar la proporción de lípidos saturados frente a monoinsaturados, la SCD influye en la fluidez de la membrana, la biogénesis de gotículas lipídicas y la síntesis de triglicéridos, ésteres de colesterol y fosfolípidos. La actividad de la SCD se integra con programas metabólicos centrales, entre ellos la lipogénesis dependiente de SREBP, la detección del estado energético vinculada a AMPK y las respuestas al estrés del RE. La desregulación de la expresión de SCD y de su capacidad de desaturación se ha asociado con alteraciones de la homeostasis metabólica y con la remodelación lipídica observada en contextos como la resistencia a la insulina, la esteatosis y la adaptación de células tumorales al estrés por limitación de nutrientes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SCD (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SCD en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SCD junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SCD tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SCD.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SCD para la investigación de la señalización de SCD, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SCD críticos para la función de SCD
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SCD para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SCD CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SCD CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SCD. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SCD (h) y el plásmido HDR SCD (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SCD para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SCD definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.