Plásmido CRISPR de Activación (h) SCAMP1: sc-403757-ACT

SCAMP1 (proteína de membrana portadora secretora 1) es una proteína de membrana tetraspánica enriquecida en endosomas de reciclaje y vesículas de transporte, donde favorece el tráfico de membranas regulado, la gemación de vesículas y el reciclaje de carga hacia la membrana plasmática. Funciona dentro de las vías endocíticas y exocíticas que coordinan el recambio de receptores, la dinámica de las vesículas sinápticas y la liberación de gránulos secretores, vinculando la actividad de SCAMP1 con la homeostasis celular y la capacidad de respuesta de la señalización. Al influir en el transporte mediado por vesículas y la remodelación de membranas, SCAMP1 puede modular la disponibilidad en superficie de receptores y transportadores de señalización, procesos que con frecuencia se ven alterados en trastornos proliferativos y neurobiológicos. Las redes de tráfico desreguladas que involucran proteínas de la familia SCAMP se han investigado en contextos como secreción alterada, reciclaje aberrante de receptores y cambios en fenotipos relacionados con la migración, la invasión y otros procesos celulares.

SCAMP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SCAMP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SCAMP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SCAMP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SCAMP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SCAMP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SCAMP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SCAMP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SCAMP1 en células tumorales con expresión de SCAMP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.