Plásmido CRISPR de Activación (m) Sc1: sc-420099-ACT

El gen murino Sparcl1 codifica Sc1 (SPARC-like 1), una glicoproteína matricelular secretada que modula la organización de la matriz extracelular y la señalización célula–matriz. Sc1 influye en la adhesión, la migración y la proliferación celulares al modelar las interacciones entre las células del estroma y la matriz circundante, con efectos posteriores sobre la remodelación tisular y procesos asociados a la vasculatura. La expresión de Sparcl1 se vincula con frecuencia a cambios en la arquitectura del estroma y a señales del microambiente que se cruzan con programas de reparación de heridas y de remodelación tipo fibrosis. En investigación biomédica, Sparcl1/Sc1 se utiliza para estudiar cómo la composición de la matriz extracelular y la señalización matricelular coordinan la homeostasis tisular y la remodelación desregulada observada en diversos modelos de enfermedad.

Sc1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Sparcl1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Sc1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Sparcl1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Sparcl1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Sc1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Sparcl1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Sc1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Sc1 en células tumorales con expresión de Sparcl1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.