Plásmido Doble Nickase (m) SASPase: sc-426779-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)SASPase consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SASPase (m) y el plásmido de doble nickasa SASPase (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Asprv1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) SASPase | sc-426779-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) SASPase | sc-426779-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Asprv1 de ratón codifica SASPase, una proteasa aspártica conocida sobre todo por su papel en la diferenciación epidérmica y la formación de la barrera cutánea. SASPase contribuye al procesamiento proteolítico de proteínas estructurales en epitelios queratinizantes, lo que favorece la cornificación y la homeostasis del estrato córneo. La alteración de la actividad de Asprv1 se ha relacionado con programas de queratinización perturbados y disfunción de la barrera cutánea, por lo que resulta relevante para estudios sobre respuestas de estrés epitelial y fenotipos cutáneos inflamatorios. En modelos murinos, Asprv1 ofrece un punto de entrada manejable para desentrañar vías reguladas por proteasas que coordinan la diferenciación terminal y la integridad tisular.
SASPase El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Asprv1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Asprv1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Asprv1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Asprv1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.