SARP3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424898
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SARP3 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SARP3, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SARP3 Anticuerpo (H-6): sc-374397
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SARP3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-424898 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Sfrp5 codifica SARP3, una proteína secretada relacionada con Frizzled que modula la disponibilidad extracelular de ligandos Wnt y ajusta finamente la señalización Wnt/β-catenina y la señalización Wnt no canónica. Al moldear las interacciones receptor–ligando en la superficie celular, SARP3 influye en la especificación del destino celular, la proliferación y la remodelación tisular durante el desarrollo y en la homeostasis del organismo adulto. En modelos de ratón, la actividad alterada de Sfrp5 se ha relacionado con una biología del tejido adiposo desregulada, inflamación y fenotipos metabólicos, lo que la hace relevante para estudios de sensibilidad a la insulina y equilibrio energético. Su naturaleza secretada también sitúa a SARP3 como un nodo clave en la señalización paracrina dentro de microambientes estroma–inmunes–epiteliales.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SARP3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sfrp5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sfrp5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sfrp5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SARP3.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sfrp5 para la investigación de la señalización de SARP3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Sfrp5 críticos para la función de SARP3
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sfrp5 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SARP3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SARP3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sfrp5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SARP3 (m) y el plásmido HDR SARP3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sfrp5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sfrp5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.