Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
SAP 97 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400865
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SAP 97 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SAP 97, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SAP 97 Anticuerpo (2D11): sc-9961
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SAP 97 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400865 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
DLG1 codifica la proteína 97 asociada a la sinapsis (SAP97), una proteína de andamiaje de la familia de las guanilato quinasas asociadas a membrana (MAGUK) que organiza complejos multiproteicos en la membrana plasmática. SAP97 regula el tráfico y la estabilización de canales iónicos y receptores, incluidos los receptores de glutamato de tipo AMPA/NMDA, y los conecta con el citoesqueleto de actina mediante interacciones a través de los dominios PDZ, SH3 y GK. Al coordinar las uniones célula–célula y la señalización de polaridad, DLG1 influye en la plasticidad sináptica, la integridad epitelial y la organización de la sinapsis inmunitaria. La desregulación de las redes de andamiaje asociadas a DLG1 se ha estudiado en fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, así como en cambios relacionados con el cáncer en la adhesión, la migración y la homeostasis de la señalización.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SAP 97 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DLG1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DLG1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DLG1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SAP 97.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DLG1 para la investigación de la señalización de SAP 97, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de DLG1 críticos para la función de SAP 97
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DLG1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SAP 97 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SAP 97 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DLG1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SAP 97 (h) y el plásmido HDR SAP 97 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DLG1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DLG1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.