SAP 18 Double Nickase Plasmid (h): sc-404214-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SAP 18 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SAP 18 Double-Nickase-Plasmid (h) und SAP 18 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SAP18 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SAP 18: sc-365377
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SAP 18 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404214-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SAP 18 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404214-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **SAP18** kodiert SAP18, eine Kernkomponente der Sin3A/HDAC-Transkriptionsrepressionsmaschinerie, die dabei hilft, sequenzspezifische DNA-bindende Faktoren mit Histondeacetylierung und Chromatinkondensation zu koppeln. Durch seine Beteiligung an der HDAC-abhängigen Genstilllegung beeinflusst SAP18 Transkriptionsprogramme, die die Zellzykluskontrolle, Differenzierung und zelluläre Stressantworten steuern. SAP18-assoziierte Komplexe greifen zudem in RNA-Prozessierung sowie apoptotische Signalwege ein und spiegeln damit eine breite Rolle bei der Aufrechterhaltung der nukleären Homöostase wider. Eine veränderte Regulation von Sin3/HDAC-Komponenten, einschließlich SAP18, wurde mit dysregulierten epigenetischen Zuständen in Verbindung gebracht, wie sie bei Krebs und anderen Erkrankungen mit aberranter Transkriptionskontrolle beobachtet werden.
SAP 18 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SAP18-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SAP18 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SAP18-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SAP18-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.