Plásmido Doble Nickase (h) SAP-1: sc-403868-NIC

ELK4 codifica el factor de transcripción SAP-1 con dominio ETS, un correagulador del factor de respuesta al suero (SRF) que se une a los sitios del factor del complejo ternario (TCF) dentro de los elementos de respuesta al suero para controlar programas de genes de respuesta inmediata. SAP-1 se fosforila aguas abajo de la señalización MAPK/ERK, conectando señales mitogénicas y de estrés con salidas transcripcionales que regulan la proliferación, la diferenciación y la expresión génica dependiente de estímulos. Mediante la regulación de promotores como FOS y otros dianas sensibles al crecimiento, ELK4 contribuye a la progresión del ciclo celular y a respuestas adaptativas a señales extracelulares. La actividad desregulada de factores ETS y la reconfiguración de la vía MAPK se han asociado con estados transcripcionales oncogénicos, lo que convierte a ELK4 en un nodo útil para estudiar la transcripción dependiente de señales en contextos relevantes para la enfermedad.

SAP-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ELK4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ELK4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ELK4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ELK4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.