SA-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423170

Panoramica

Mouse Stag1 codifica SA-1, un componente essenziale del complesso della coesina che controlla la coesione tra cromatidi fratelli, l’organizzazione della cromatina di ordine superiore e la corretta segregazione dei cromosomi durante mitosi e meiosi. SA-1 contribuisce alla stabilità del genoma e alla regolazione trascrizionale modulando il looping della cromatina a lunga distanza e coordinando i processi di replicazione e riparazione del DNA. Attraverso queste funzioni, STAG1 si intreccia con i checkpoint del ciclo cellulare e con le vie di risposta al danno al DNA, risultando quindi rilevante per studi su aneuploidia, instabilità cromosomica e fenotipi di sviluppo associati alla coesina. L’alterazione o la disregolazione delle subunità della coesina, inclusa SA-1, è spesso indagata nel contesto di programmi di espressione genica modificati e della biologia tumorale, senza implicare esiti clinici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SA-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Stag1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Stag1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Stag1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SA-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Stag1 per lo studio della segnalazione di SA-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Stag1 critici per la funzione di SA-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Stag1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SA-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SA-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Stag1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SA-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SA-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Stag1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Stag1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.