Plasmide CRISPR d'Activation (h) S-100A5: sc-418401-ACT

S100A5 code pour S-100A5, une protéine liant le Ca2+ de la famille S100, qui agit comme un capteur intracellulaire dynamique reliant les flux de calcium à des modifications des interactions protéiques et de l’état cellulaire. Comme les autres protéines S100, S-100A5 peut influencer la signalisation et l’organisation du cytosquelette en modulant des protéines cibles de façon dépendante du calcium, en intégrant des signaux qui affectent la différenciation cellulaire et les réponses au stress. L’expression de S100A5 est enrichie dans les tissus nerveux et a été utilisée comme marqueur d’états de lignée neuronale et gliale, soutenant les études des programmes neurodéveloppementaux et de la transcription dépendante de l’activité. Une signalisation dérégulée de la famille S100 est fréquemment étudiée en inflammation et en biologie du cancer, ce qui fait de S100A5 un nœud utile pour sonder des réseaux régulateurs liés au calcium dans des contextes pertinents pour les maladies.

S-100A5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de S100A5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

S-100A5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus S100A5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription S100A5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de S-100A5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus S100A5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de S-100A5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie S-100A5 dans les cellules tumorales présentant une expression de S100A5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.