Plasmide CRISPR d'Activation (h) S-100 β chain: sc-400707-ACT

S100B code la chaîne S‑100β, un membre de la famille des protéines S100 se liant au Ca2+ et agissant comme un nœud de signalisation en modulant la phosphorylation des protéines, l’activité enzymatique et la dynamique du cytosquelette. Dans le système nerveux central, elle est particulièrement abondante dans les astrocytes et peut influencer les programmes de soutien neuronal, l’homéostasie du calcium et des états transcriptionnels sensibles au stress. La protéine S‑100β interagit avec des protéines régulatrices clés, façonnant des processus tels que la progression du cycle cellulaire, la différenciation, la migration et la signalisation inflammatoire. Une expression dérégulée de S100B est fréquemment utilisée comme corrélat moléculaire de la neuroinflammation et de la gliose, et a été associée à des modifications des réseaux de signalisation dans des troubles neurologiques ainsi qu’à des phénotypes liés au cancer.

S-100 β chain Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de S100B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

S-100 β chain Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus S100B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription S100B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de S-100 β chain. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus S100B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de S-100 β chain au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie S-100 β chain dans les cellules tumorales présentant une expression de S100B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.