Plásmido CRISPR de Activación (h) RyR-3: sc-402031-ACT

El gen humano **RYR3** codifica el receptor de rianodina 3 (RyR-3), un gran canal de liberación de Ca²⁺ del retículo endoplásmico/sarcoplásmico que amplifica las señales intracelulares de calcio en respuesta a segundos mensajeros situados aguas arriba. RyR-3 contribuye a la dinámica del calcio asociada al acoplamiento excitación–contracción, a la liberación de calcio inducida por calcio y a procesos más amplios dependientes de Ca²⁺, como la secreción, la plasticidad sináptica y programas de transcripción controlados por la señalización de CaMK y de calcineurina/NFAT. Al modular la homeostasis de Ca²⁺ en el citosol y en los orgánulos, **RYR3** influye en el acoplamiento mitocondrial, la excitabilidad de membrana y las respuestas al estrés. Las alteraciones en el manejo del calcio mediado por receptores de rianodina se han implicado en fenotipos neurológicos y musculares y se estudian en el contexto de mecanismos de enfermedad arritmogénica y del neurodesarrollo, sin que ello implique resultados clínicos.

RyR-3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RYR3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RyR-3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RYR3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RYR3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RyR-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RYR3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RyR-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RyR-3 en células tumorales con expresión de RYR3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.