Plásmido CRISPR de Activación (m) Rtl1: sc-436156-ACT

El Rtl1 (retrotransposon-like 1) de ratón codifica una proteína improntada de expresión paterna, altamente enriquecida en la placenta en desarrollo, y contribuye al crecimiento fetal al sostener la función del trofoblasto y el desarrollo vascular placentario. La actividad de Rtl1 se vincula a procesos que regulan la supervivencia celular, la diferenciación y la remodelación tisular en la interfaz materno‑fetal, con efectos posteriores sobre el intercambio de nutrientes y la homeostasis del desarrollo. La expresión desregulada de RTL1 se ha asociado con defectos de impronta y fenotipos de placentación anómala, lo que la hace relevante para estudios de trastornos del desarrollo y de la regulación del crecimiento. Como locus improntado, Rtl1 también sirve como modelo para investigar el control epigenético, la expresión específica de alelo y mecanismos reguladores no canónicos en el desarrollo de los mamíferos.

Rtl1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Rtl1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rtl1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Rtl1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Rtl1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rtl1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Rtl1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rtl1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rtl1 en células tumorales con expresión de Rtl1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.