Plásmido CRISPR de Activación (h) RTEL1: sc-403196-ACT

RTEL1 codifica la helicasa 1 reguladora del alargamiento de los telómeros, una helicasa de ADN esencial para mantener la integridad telomérica y la estabilidad global del genoma. RTEL1 promueve una replicación fiel del ADN al desmantelar estructuras secundarias aberrantes como los T-loops y los G-cuádruplexes, favoreciendo el avance de la horquilla de replicación y limitando la recombinación homóloga inapropiada. A través de sus funciones en el mantenimiento de los telómeros, la señalización de la respuesta al daño del ADN y la supresión de la inestabilidad genómica, RTEL1 influye en la senescencia celular y la estabilidad cromosómica. La desregulación de la función de RTEL1 se ha vinculado a trastornos de la biología de los telómeros y a una mayor susceptibilidad a fenotipos asociados con inestabilidad genómica, relevantes para la biología del cáncer y la investigación de enfermedades degenerativas.

RTEL1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RTEL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RTEL1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RTEL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RTEL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RTEL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RTEL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RTEL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RTEL1 en células tumorales con expresión de RTEL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.