RSP3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413513

Descripción general

RSPH3 codifica el homólogo 3 de la cabeza del radio (RSP3), un componente estructural del complejo de radios en cilios y flagelos móviles que ayuda a acoplar la actividad de la dineína axonemal con el deslizamiento coordinado de los microtúbulos y la regulación del batido ciliar. A través de su función dentro de la arquitectura del axonema 9+2, RSP3 contribuye a la generación adecuada de la forma de onda y a una depuración mucociliar eficiente. La alteración del ensamblaje o de la señalización de los radios se asocia a ciliopatías móviles, incluidos fenotipos de discinesia ciliar primaria caracterizados por una motilidad ciliar deficiente. Como resultado, RSPH3 se estudia ampliamente en vías que regulan la biogénesis de los cilios, la organización axonemal y la fisiología de los tractos respiratorio y reproductor.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RSP3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RSPH3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RSPH3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RSPH3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RSP3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RSPH3 para la investigación de la señalización de RSP3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RSPH3 críticos para la función de RSP3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RSPH3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RSP3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RSP3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RSPH3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RSP3 (h) y el plásmido HDR RSP3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RSPH3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RSPH3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.