Plasmide CRISPR/Cas9 KO RRS1 (h): sc-409839

Présentation

RRS1 (homologue du régulateur de la biogenèse des ribosomes) est une protéine nucléolaire conservée, indispensable à la maturation et à l’export de la sous-unité ribosomique 60S grâce à ses rôles dans la maturation du pré-ARNr et l’assemblage des précurseurs de la grande sous-unité. Elle interagit avec des facteurs de biogenèse des ribosomes et contribue à l’organisation du nucléole, reliant la capacité de traduction à la croissance cellulaire et à la progression du cycle cellulaire. Une perturbation de la production des ribosomes peut activer la signalisation du stress nucléolaire et modifier les points de contrôle dépendants de p53, faisant de RRS1 un nœud pertinent pour l’étude de la protéostasie et du contrôle de la croissance. Une régulation aberrante des voies de biogenèse des ribosomes, incluant des composants tels que RRS1, est fréquemment associée à des phénotypes prolifératifs et présente un intérêt pour des études mécanistiques en biologie du cancer et dans les ribosomopathies apparentées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RRS1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RRS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RRS1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RRS1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RRS1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RRS1 pour l'étude de la signalisation de RRS1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RRS1 essentiels à la fonction de RRS1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RRS1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RRS1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RRS1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RRS1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RRS1 plasmide HDR (h) et le RRS1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RRS1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RRS1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.