RPTPα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422515
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- RPTPα El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico RPTPα, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RPTPα Anticuerpo (H-4): sc-398203
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
RPTPα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422515 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen murino *Ptpra* codifica la fosfatasa tirosina proteína alfa de tipo receptor (RPTPα), una fosfatasa transmembrana que modula la señalización al desfosforilar residuos de tirosina inhibidores en quinasas de la familia Src y sustratos relacionados. A través de esta actividad, influye en la adhesión mediada por integrinas, la dinámica de las adhesiones focales, la remodelación del citoesqueleto y la señalización posterior MAPK/ERK, que en conjunto determinan programas de proliferación, migración y diferenciación. RPTPα también participa en el crosstalk con receptores tirosina quinasa y puede ajustar los umbrales de señalización en contextos neuronales y relacionados con el sistema inmunitario. La desregulación de la señalización de *Ptpra* se ha vinculado a procesos relevantes para la transformación oncogénica y el comportamiento invasivo, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos del equilibrio quinasa/fosfatasa en vías asociadas a enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO RPTPα (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ptpra en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ptpra junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ptpra tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RPTPα.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ptpra para la investigación de la señalización de RPTPα, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ptpra críticos para la función de RPTPα
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ptpra para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido RPTPα CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido RPTPα CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ptpra. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RPTPα (m) y el plásmido HDR RPTPα (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ptpra para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ptpra definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.