RPGR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404441

Descripción general

RPGR (regulador de la GTPasa de la retinitis pigmentosa) codifica una proteína ciliar enriquecida en el cilio de conexión de los fotorreceptores, donde favorece el transporte intraflagelar y el tráfico de cargas asociadas a membrana necesarias para el mantenimiento del segmento externo. RPGR interactúa con complejos asociados a los cilios y contribuye a procesos de transporte dependientes de microtúbulos que preservan la estructura del cilio y su competencia de señalización. La alteración de RPGR perturba la función ciliar y la homeostasis de los fotorreceptores, vinculando su pérdida de función con fenotipos de degeneración retiniana hereditaria, como la retinitis pigmentosa ligada al X. En investigación biomédica, RPGR se estudia habitualmente en el contexto de los mecanismos de las ciliopatías, la biología celular de los fotorreceptores y las relaciones genotipo–fenotipo en las enfermedades retinianas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RPGR (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RPGR en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RPGR junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RPGR tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RPGR.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RPGR para la investigación de la señalización de RPGR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RPGR críticos para la función de RPGR
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RPGR para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RPGR CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RPGR CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RPGR. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RPGR (h) y el plásmido HDR RPGR (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RPGR para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RPGR definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.